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胆红素、胆固醇、肝素常见生化药品的提取方法

文章作者:农植业 上传时间:2019-05-10

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1 .海狸鼠屠体脂肪的利用

经抽样解剖得知,海狸鼠的皮下脂肪占胭体比例比猪的皮下脂肪少得多,多聚集在鼠蹊部和臀部,呈白色,脂肪占胭体重的 4 . 5 %左右。海狸鼠脂肪熔点低,易于吸收,大约含 61 %的不饱和脂肪酸。其中,亚油酸占 24 . 78 % ,是貉油亚油酸含量的 2 倍,是水貂油亚油酸含量的 2 . 7 倍。海狸鼠脂肪中除含有较高的人体必需的脂肪亚油酸外,还含有丰富的维生素 A 、维生素 E 、维生素 K ,且海狸鼠的脂肪无异味,澄清透明,是一种优良的动物脂肪。其中维生素 A 和维生素 E 的含量均高于貉油。海狸鼠脂肪中还含有维生素 K ,因此比貉油具有更高的利用价值。海狸鼠脂肪的化学性质较为稳定,其 pH 值也与人体皮肤的 pH 值( 4 . 5 ~ 6 . 5 ) 基本一致,用海狸鼠脂肪为原料制成的营养霜,酸碱度适中,适合于人体皮肤搽用。海狸鼠脂肪的碘值大大低于猪油和水貂油,与貉油相近,说明海狸鼠油和貉油不易氧化酸败,利用其制作的化妆品膏霜也不易酸败变质,性质相对稳定。

一、胆红素 利用猪胆汁提取胆红素,工序如下: 1. 取新鲜胆汁用纱布过滤,除去杂质。 2. 在盛胆汁的缸中加入澄清石灰水,石灰水量冬季为胆汁量的3.5倍,夏季为4倍。 3. 把胆汁和石灰水充分搅拌后慢慢加热,温度升到50~60℃时,除去表面浮起的白沫。 4. 当温度升到60℃时,开始出现胆红素钙盐小颗粒,当温度升到95℃时,液面就会浮起一层橘黄色的胆红素钙盐。 5. 将胆红素钙盐从缸中捞出,再用细纱布过滤,然后将滤下的胆红素钙盐用热水冲洗干净。 6. 将洗净的胆红素钙盐倒入盆中,再倒入相当于胆红素钙盐1倍量的水,研成糊状。 7. 在胆红素钙盐糊中加入1%亚硫酸氢钠,并不断搅拌,随后缓慢滴加1∶1的稀盐酸,使pH值保持在1~2。

2 .利用海狸鼠屠体心脏提取

三磷酸腺普( ATP ) 在冬季屠宰海狸鼠取皮时,挑出快速处死后的海狸鼠屠体的心脏,称重,低温冷藏备用。将海狸鼠的心脏绞碎,盛于玻璃器皿,按如下流程操作即可制得 ATP 钠盐。绞碎的海狸鼠心脏一盛于清洁的烧杯内一加 4 %浓度的三氯乙酸,用玻棒搅匀,静置 3 ~ 4 小时一过滤一滤渣(滤液)一加 4 %三氯乙酸一过滤一加氢氧化钠溶液调 pH 值至 6 . 8 一滴加 50 %的乙酸钠一白色沉淀一再滴加乙酸钠至沉淀消失一静置 30 分钟一离心一倒去上清液一用蒸馏水洗沉淀一搅拌一过滤一淡黄色沉淀一加 0 . 2 摩硝酸调 pH 值至 3 一离心一取上清液盛于瓶内一滴加罗曼氏试剂~ 0 ℃ 下静置15分钟一出现白色颗粒沉淀一离心一倒去上清液一取出白色颗粒沉淀一加蒸馏水一成微酸性混浊液一置通风橱内一通人硫化氢气体一~混浊液由白色一微黄一棕黄一深棕一黄带黑一淡黑一墨黑一静置 10 ~ 15 分钟一出现黑色沉淀一过滤一取澄清液一用抽气机抽净硫化氢气体一卜用氢氧化钠溶液调州值至 6 . 8 一加乙酸钡,使沉淀完全一抽滤一分别用 1 %乙酸钡, 50 %、 75 %、 95 %乙醇洗沉淀~ 60 ℃ 下烘干一即得 ATP 钡盐一用 0 . 1 摩盐酸酸解一加 40 %硫酸钠一产生白色沉淀一离心一取上清液一加氢氧化钠溶液调 pH 值至 8 一即得 ATP 钠盐。

  1. 静置15分钟后,用细纱布滤去酸液,让其慢慢聚结成深红色的团块。 9. 将少量浓度90%以上的酒精加入深红色的团块中,让团块溶解成糨糊状。 10.在糊状物中加入10倍量浓度90%以上的酒精和0.5%亚硫酸氢钠,调整pH值到3~4,静置16小时。 11.沉淀后,吸去上面的清亮液,将底部的沉淀物再用10倍量的酒精洗涤1次,即可得到粗制的胆红素。 粗制的胆红素可交售给生化制品厂,再进一步加工为精制胆红素。 二、孕马血清 孕马血清在畜牧生产中应用广泛,它能促进母畜的卵巢功能恢复,诱发母畜发情和超数排卵,治疗公、母畜的性机能衰退,使猪、羊、兔等多胎多产,是提高养殖业经济效益的激素药物。 孕马血清的提取方法:选取妊娠60~100天的健康母马(查明胎儿是马而不是骡),颈静脉采血,每次1000~2000毫升,将采集的血液盛于已经消毒、干燥过的长筒状玻璃容器中,然后置于温室中使其迅速凝固。为了更多地析出血清,可在血凝后压上一重物。一般每100毫升血液可析出45~50毫升血清,(www.nczfj.com)将析出的血清吸出,分装备用。如暂时不用,可以加入0.5%石炭酸防腐,放入冰箱,可保存一年不变质。 三、胆固醇 胆固醇是一种医药和化工原料,是人工牛黄的成分之一,可作为原料合成其他甾体化合物,如维生素D3等。 从动物脑、脊髓中提取胆固醇,先将脑、脊髓制成干燥物,用丙酮选择性提取胆固醇。将丙酮提取液蒸发到近乎干燥,加入适量95%乙醇,加热使其残余物溶解,将此乙醇溶液放凉,胆固醇即结晶析出,再用酸水解或用碱皂化或水洗胆固醇粗结晶,除去黏附的磷脂质等,在95%乙醇中重结晶,最后把结晶置于70~80℃干燥器中除去水分即可。 四、肝素 肝素又称肝素钠,是以羊、猪小肠黏膜为原料提取制成的药物,具有抗血凝、防止血栓、治疗冠心病等功效,近年大量出口、售价很高。肝素生产设备比较简单,技术易为掌握,成本较低。
  2. 羊小肠黏膜提取肝素 原料:十二指肠和部分空肠,长约40厘米,清水漂洗去污物,去除外层脂肪,绞碎成糜状。由于肠中总固体量较小,且有肠皮和断节小肠,纹碎度至关重要,与提取率密切相关。 工艺流程:羊小肠黏膜→碱解→盐解→过滤→离子交换→洗涤→洗脱→沉淀→沉淀物→脱水→干燥→肝素粗制品。 ①碱解、盐解。按羊小肠黏膜500千克计算,置于真空反应锅内,边搅拌边加食盐25千克,用30%氢氧化钠溶液将pH值调到9~9.5,升温到50~60℃,停止搅拌,保温1.5~2.0小时,再迅速升温到90~98℃,并间隔搅拌,保温15分钟。 ②过滤。将上述提取液趁热过滤,弃去滤渣进行第二次提取,合并滤液并取样化验。 ③离子交换。待滤液冷却到50℃时,调节pH值到8.5~9.0,按羊肠黏膜重量的7%加入D-254树脂,搅拌8~10小时。 ④洗涤和洗脱。将以上交换液过滤,弃除滤液,用清水漂洗干净树脂,滤干,先用8%氯化钠液洗涤1次,后用7%氯化钠液洗涤3次,滤干后洗脱。第一次用23%~24%氯化钠液洗脱5小时,第二次和第三次各用23%~24%氯化钠液洗脱2小时。 ⑤沉淀。将洗脱液缓慢加入1.2~1.5倍量的95%酒精,搅拌片刻,静置过滤,次日用虹吸法除去上清液,剩下的沉淀物用布氏漏斗抽干。 ⑥脱水干燥。经抽干水的沉淀物用95%酒精和丙酮脱水,直到沉淀物干松为止。将干松的沉淀物置于真空干燥器内真空干燥5小时左右,即得到灰白色的粉末——肝素粗制品。
  3. 猪小肠黏膜提取肝素 工艺流程:猪肠黏膜→提取→过滤→离子交换→洗涤→洗脱→酒精沉淀→肝素粗制品。 ①提取。取新鲜肠黏膜投入反应锅内,加入3%氯化钠液,用30%氢氧化钠将pH值调到9.0,升温到50~55℃,保温2小时,再迅速升温到95℃,保温10分钟,然后冷却过滤。过滤用30目双层纱布。 ②离子交换。待冷却到50℃时加入714型树脂,搅拌8小时后静置过夜。 ③洗涤。次日虹吸除去上清液,收集树脂,水冲洗至洗液澄清、滤干,用2倍量的8%氯化钠液搅拌2小时、滤干,再用1倍量的8%氯化钠液搅拌2小时、滤干。 ④洗脱。继续用2倍量的17%~18%氯化钠液搅拌洗脱8小时、滤干,再用1倍量17%~18%氯化钠液搅拌洗脱2小时、滤干。 ⑤酒精沉淀。将滤液合并,加入等量的95%酒精沉淀、过滤,虹吸去上清液,收集沉淀,用丙酮脱水、干燥,即得肝素粗制品。 (作者联系地址:河北省广平县综合职业教育中心 邮编:057650)

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